酶底物法檢測(cè)試劑

1.工作原理：

加入含有總大腸菌群細(xì)菌的水樣，目標(biāo)細(xì)菌在Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中36℃培養(yǎng)，總大腸菌群細(xì)菌產(chǎn)生的特異性生物酶-半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的色源底物ONPG，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色;同時(shí)水樣中大腸埃希氏菌產(chǎn)生特異性的β-葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的熒光底物MUG，產(chǎn)生特征性熒光。同樣原理，耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)在44.5℃培養(yǎng)時(shí)會(huì)分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的色源底物ONPG，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。

2.操作方法

100ML水樣中加入酶底物法試劑擰緊蓋子搖勻至完全溶解。 將定量瓶100ML水樣全部倒入定量盤中。 將51孔或者97孔定量盤用程控封口機(jī)定量封口。 選擇培養(yǎng)所需溫度放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。 對(duì)照陽(yáng)性比色盤數(shù)出大小孔的陽(yáng)性數(shù)量并做好記錄。 參照標(biāo)準(zhǔn)MPN表，分別查出97孔或者51孔的具體數(shù)值。

3.定性測(cè)試：

(1)在100ml水樣中加入試劑，溶解，36℃±1℃培養(yǎng)24h;

(2)結(jié)果判讀

無(wú)色=陰性

黃色=總大腸菌群陽(yáng)性

黃色+熒光=大腸埃希氏菌群陽(yáng)性

注:耐熱大腸群菌(糞大腸菌群)需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色為陽(yáng)性

4.定量檢測(cè)

(1)在100ml水樣中加入試劑，溶解;

(2)倒入51孔定量檢測(cè)盤(定量孔板)或97孔定量檢測(cè)盤(定量孔板)中;

(3)用程控定量封口機(jī)對(duì)定量檢測(cè)盤(定量孔板)進(jìn)行封膜，36℃±1℃培養(yǎng)24h;

(4)定量檢測(cè)盤(定量孔板)結(jié)果判讀:

無(wú)色=陰性

黃色格子=總大腸菌群陽(yáng)性

黃色+熒光格子=大腸埃希氏菌群陽(yáng)性

查對(duì)照MPN表計(jì)數(shù)

注:耐熱大腸群菌(糞大腸菌群)需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色格子為陽(yáng)性結(jié)果，查對(duì)照MPN表計(jì)數(shù)。

水質(zhì)大腸菌群酶底物法檢測(cè)系統(tǒng)：

由程控定量封口機(jī)、51或97孔檢測(cè)板、100mL定量瓶、酶底物檢測(cè)試劑四部分組成。檢測(cè)水樣范圍:飲用水、源水、瓶裝水、中水、二次供水、管網(wǎng)水、廢水、食品水、畜牧用水、醫(yī)療用水等。

該檢測(cè)方法采用大腸桿菌產(chǎn)生β-半乳糖苷酶分解色源底物-ONPG(Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside) 使培養(yǎng)液呈黃色。大腸埃希氏菌產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4 - methyl-umbelliferyl-β-glucuronide）使培養(yǎng)液在波長(zhǎng)366 nm 紫外光下產(chǎn)生熒光的原理,來(lái)定性定量水中總大腸菌群、糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）及大腸埃希氏菌。

該檢測(cè)方法是國(guó)際上發(fā)達(dá)國(guó)家普遍采用的檢測(cè)方法,相比我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法,如多管發(fā)酵及濾膜法具簡(jiǎn)便快捷，其選擇性培養(yǎng)基具有抑制雜菌的作用，假陽(yáng)性低，定量準(zhǔn)確。由于該方法的方便快速，在實(shí)驗(yàn)室日常檢測(cè)中能提高效率，縮短檢測(cè)時(shí)間，在應(yīng)急監(jiān)測(cè)中能及時(shí)報(bào)出數(shù)據(jù)，避免造成大的公共安全事故。

國(guó)產(chǎn)酶底物法檢測(cè)試劑完全符合《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》的培養(yǎng)基，采用固定底物技術(shù)酶底物法。200個(gè)/盒。能夠精確檢出100ml水樣中單個(gè)的活性總大腸菌群和大腸埃希氏菌，以及糞大腸菌群，假陰性率低。每個(gè)單位試劑可抑制200萬(wàn)個(gè)異養(yǎng)細(xì)菌，假陽(yáng)性率低。能夠消除傳統(tǒng)方法中的主觀判斷影響，準(zhǔn)確性高于濾膜法及多管發(fā)酵法。